前言
经典诱发性帕金森病动物模子 ，多接纳利血平、6-OHDA、MPTP诱导啮齿类和灵长类动物法。
部分造模要领
使用动物：大鼠
【造�；啤浚�
1. 利血平是一种生物复合物 ，可以通过关闭囊内不可逆的单胺的运输 ，消耗中枢和外周的单胺 ，导致肌肉僵硬 ，姿势弯曲 ，运动减慢或无能 ，从而泛起了与帕金森病相似的临床症状。
2. 6-OHDA和DA的结构相似。在动物机体内 ，6-OHDA被转送至儿茶酚胺类神经通路吸收系统 ，6-OHDA代谢导致众多氧化应激征象 ，由于自由基的形成最终使得DA神经元抗过氧化系统破损 ，随着自由基对线粒体功效的损伤 ，其膜稳固性和DNA完整性的破损 ，最终致使细胞殒命。在注射6-OHDA的30分钟内即可视察到6-OHDA对DA神经元迫害作用 ，注射14~26天90％以上DA细胞丧失。将差别剂量的6-OHDA定位注射于大鼠的黑质周围和黑质纹状体通路上均能够选择性损毁黑质内DA神经元 ，可模拟出自觉性帕金森病的原始病理历程 ，最终爆发类似自觉性帕金森病。
3. 黑质选择性毒物MPTP ，自己不具有神经毒性 ，但可以穿越血－脑脊液屏障 ，并主要在星形胶质细胞和5-HT能神经元内的单胺氧化酶B作用后转变为有毒性的1－甲基－4苯基吡啶离子(MPP+), 然后释放到细胞外 ，MPP+不可穿越血－脑脊液屏障 ，而是经由DA转运体进入DA能神经末梢和胞体。MPP+对DA细胞的选择性毒性源于它被选择 性摄着迷经元 ，一旦进入DA神经元末梢 ，MPP+被逆行转运至黑质 ，从而通过干预线粒体 ，引起脂质过氧化 ，使得膜结构杂乱 ，影响细胞功效 ，最终导致选择性破损黑质DA能神经元 ，导致黑质DA能神经元大宗殒命 ，纹状体酪氨酸羟化酶阳性纤维大宗损失 ，纹状体DA及其代谢产品3,4-二羟基苯乙酸、高香草酸水平均显着降低 ，也有黑质纹状体小胶质细胞和星形细胞的增生和蓝斑、下丘脑等区的损伤 ，与帕金森病患者的改变基内情同。
【造模要领】：
1. Wistar大鼠 ，体重200~220g,10周 ，腹腔内注射一定剂量的利血平后可使其泛起骨骼肌僵硬、震颤、身体愚昧、运动镌汰及其他的一些类似的帕金森病临床主要运动症状。
2. 6-OHDA损伤大鼠帕金森病模子 ，6-OHDA定向性注射通常定位千中心前脑束 ，而不是黑质致密区 ，由于前者包括了所有传出于黑质致密层和前侧盖区的DA能神经束。因此 ，与注射于黑质致密区相比 ，当6-OHDA注射在中心前脑束时 ，DA细胞丧失更多 ，并且6-OHDA在中心前脑束导致损伤的病理转变与视察到的自觉性帕金森病有极强的相关性。常用的6-OHDA损伤的大鼠帕金森病模子是6-OHDA单侧损伤大鼠帕金森病模子。它是用6-OHDA单侧注射大鼠中脑黑质诱发的单侧中脑黑质DA神经元损毁模子。
立体定向毁损详细历程如下 ，将经重复行为检测确认无旋转行为的大鼠举行实验。接纳距离注射两点法制模：腹腔注射10％水合氯醛(40mg/kg) 将大鼠麻醉后 ，牢靠于Stoelting脑立体定向仪上（使双侧耳杆尖端插入外耳道 ，可听到“咔嚓＂声 ，并使头部两侧坚持在水平位置；门齿勾低于耳杆平面2.4mm ，使前、后囟水平高度相差0.4mm以下）。通例消毒后 ，切开头皮约1.0cm ，剥离骨膜 ，确定右侧黑质致密部和中脑腹侧被盖坐标 ，用针尖标记。牙科钻小心钻透颅骨（注重勿损伤硬脑膜） ，按确定坐标将微抵注射器毗连于微最推进器上 ，笔直入颅 ，缓慢进针到预定深度 ，向黑质致密区和中脑腹侧被盖区各注射6-OHDA 8µg（溶于4µl含质量分数为0.2％抗坏血酸的心理盐水中） ，注射深度应以针孔斜面中点为参照点 ，针尖向前 ，包管6-OHDA能准确注入预定部位 ，注射速率为1μl/min ，留针10分钟 ，缓慢退针(1mm/min)。牙科胶笼罩钻孔 ，通例缝合伤口 ，一连腹腔注射青霉素5万U一周以避免熏染。
3. 大鼠对MPTP不敏感 ，不易诱发与帕金森病临床相似的动物模子 ，虽然小鼠相对敏感 ，但在30mg/(kg·d)剂量5~10天的作用下 ，黑质A10区、蓝斑、背核及下丘脑的神经元仍不受任何影响。制作MPTP非人灵长类帕金森病模子常接纳非人灵长类动物全身静脉、浅静脉、颈总静脉或腹腔注射MPTP要领举行。选用成年非人灵长类动物 ，注射MPTP (0.2~0.5mg/kg) ，天天1次 ，共15~18天 ，也有报道仅用4~6天（剂量巨细差别、年岁选择差别、注射部位和途径差别造成的差别） ，所有动物均能泛起帕金森病样症状 ，与人体爆发的症状相似。
【模子特点】：
1. 运用利血平诱发的大鼠帕金森病模子对快速评价治疗帕金森病的药物具有主要的价值。该模子迅速易得 ，但其症状会爆发可逆性转变 ，该模子的弱点是不可深入复制自觉性帕金森病的病理历程。因此 ，不可用于慢性DA消耗时爆发的一些临术转变的研究。该模子的另一缺陷在于 ，它与自觉性帕金森病相比 ，当5-HT、去甲肾上腺素降到一个很低的水平时 ，可能导致两者爆发差别的药理学反应。另外 ，通过注射酪氨酸类似物（1－甲基酪氨酸） ，可抑制DA和去甲肾上腺素的合成 ，对啮齿类动物具有与利血平诱导相似的功效 ，因此可选择此要领复制帕金森病模子。
2. 由于同侧纹状体DA功效的损失 ，动物体现出向与6-OHDA引起的损伤部位相反侧自觉旋转 ，体现神经节向丘脑和中脑运动区发出的激动镌汰 ，该模子关于相识黑质纹状体通路降解时病理、电心理和药理学转变很是有用 ，有利于我们对帕金森病症状爆发气制的明确。假设在帕金森病中这种激动属于过量运动 ，那么这种行为所代表着的就是抗帕金森病的作用。只管6-OHDA单侧损伤复制的大鼠帕金森病模子与帕金森病患者在病理学、药理学的转变相似 ，可是这种动物模子仍保存一些弱点。由于在这个模子中6-OHDA的损伤属单侧 ，通过大脑非损伤侧赔偿介导的通路 ，可以影响大脑的单侧作用DA消耗的改变。6-OHDA制备的大鼠模子需要立体定向仪等特殊装备 ，制作手艺要求高 ，但大鼠易控制 ，泉源广 ，价钱低 ，行为一连时间长且视察利便 ，因而是常用的模子之一。
3. MPTP诱导的啮齿类动物模子所体现的症状和病理转变与人帕金森病临床主要体征相去甚远。现在看来没有太大的推广价值。MPTP制备的非人灵长类帕金森病模子要领简朴 ，行为体征、病理特征与人类更相似 ，加之非人灵长类进化上的类人性、视察和取材的易操作性 ，而普遍受到人们的接待。此模子显着优于6-OHDA模子 ，是现在应用最普遍的模子。
【模子的评估和应用】：
1. 应用利血平模子迅速发明了L-DOPA可作为治疗帕金森病的潜在药物。到现在为止 ，这种药物依然是临床治疗帕金森病的首选药物和主要药物。
2. 6-OHDA单侧损伤复制的大鼠帕金森病模子 ，可从模子动物旋转数目和偏向上加以评估。由于动物行为特异性差别 ，判断大鼠帕金森病模子是否乐成 ，通常以动物泛起旋转行为的次数为标准 ，一样平常凌驾7转／min即为乐成的帕金森病模子 ，不然为不乐成模子。6-OHDA损伤动物引起的旋转被以为是抗帕金森病的行为 ，但诸如震颤、强直和运动减慢等帕金森病的主要临床症状却没在这些动物中泛起。通过双侧注射6-OHDA在啮齿类动物中心前脑束引起损伤的步伐也可诱导出帕金森 病症状 ，可是一些倒运的症状包括吞咽难题、高致死率等使得这些帕金森病模子无法普遍应用 ，因而不常用。当直接向纹状体注射6-OHDA时 ，一些动物纹状体DA中枢端通路爆发部分耗竭 ，在这种帕金森病模子中 ，纹状体神经元退化速率非�；郝�。与中心前脑束注射6-OHDA相比 ，向纹状体注射6-OHDA时 ，黑质纹状体神经元退化的速率与自觉性帕金森病极其相似。可是 ，经纹状体注射6-OHDA引起部分损伤 ，纹状体中DA耗竭缺乏可以引起异常运动。因此 ，当评估治疗帕金森病能力时 ，不可使用向纹状体注射6-OHDA复制的帕金森病动物模子。
3. 非人灵长类动物是人类进化历程的近亲 ，在神经系统的爆发发育学上体现出与人类亲近的相关和相似性 ，且其行为与人类行为的可比性 ，都提醒着研究者对它们的关注。MPTP意外发明和在非人灵长类动物体的使用 ，使帕金森病动物模子的各方面研究有了长足的前进。MPTP损伤后 ，非人灵长类动物会显示姿势异常、运动镌汰、四肢主要弯曲、肢体强直伴有震颤、吞咽难题、不可进食、发音削弱、定向反应性削弱等体征。动物反应的水平与MPTP剂量及动物年岁有关 ，给予L-DOPA后所有症状减轻。
前面提及的对放线菌素等一类细菌、真菌和植物可合成爆发的卵白质酵解抑制剂在大鼠的研究效果 ，同样在非人灵长类帕金森病模子的研制中引起关注。美国Machel Jackson Foundation、英国Motac Neuroscience、法国Basal Gang等跨国研究机构和组织均已在这方面的研究中有所投入。使PSI导致非人灵长类帕金森病的研究成为该病非人灵长类动物模子制作的新热门话题。李秦等和Motac Neuroscience开展相助研究 ，已经最先并且阶段性地完成了部分研究事情 ，研究发明该要领制造的非人灵长类帕金森病模子具有较高优越性：①造模制剂毒性温顺 ，没有普遍的急性毒副作用 ，不会引起动物瘫痪和殒命 ，大大降低造模危害；②造模历程相对缓和 ，在动物机体不泛起强烈体征波动的情形下 ，即可完成模子的制作 ，越发近似于人类原发性帕金森病的病理历程；③在脑内形成的病变换类似于人类 ，尤其是黑质中DA神经元的缺失的PET磨练越发能够批注其模子相似性；④动物模子的行为体现与MPTP损伤稳固后的模子无显着差别。关于在黑质DA神经元中是否可见Lewy样容纳体 ，还要进一步视察。
综上所述 ，由于帕金森病发病机制并不是很明确 ，现有模子和自觉帕金森病不具有完全相同病因学 ，但一定有相似性。已有的几种非人灵长类和啮齿类动物模子都是通过对脑部施加实验因素完成的 ，这些模子都不会泛起与原发性帕金森病完全相同的病理心理改变和神经分解模式 ，特殊是在疾病举行性转变方面更不可很好体现。在现在还没有更好的造模要领的情形下 ，可以说 ，MPTP诱导的非人灵长类帕金森病模子是现在较为成熟、有价值的帕金森病研究载体 ，MPTP制备的非人灵长类帕金森病模子 ，要领轻盈 ，行为和病理方面的转变与人相近。PSI诱导的非人灵长类怕金森病模子不但涵盖了MPTP制备的非人灵长类帕金森病模子的所有优点 ，并且在疾病爆发上越发与人类原发性帕金森病相似 ，是情形毒素致病学说的有力佐证 ，有辽阔开发和应用远景。
类似于人的帕金森病临床继发症 ，使用MPTP诱导猕猴泛起帕金森病主要体征之后 ，机体也会泛起许多病理、心理、代谢功效上的转变 ，这些综合因素配相助用的效果就会使动物泛起种种各样的临床症状。随着帕金森病三大主要体征：运动减慢、震颤和强直的泛起和加剧 ，动物的食欲和采食能力也一直下降 ，若不实时接纳响应的对策和有用的处置惩罚要领 ，动物的体质将迅速降低 ，泛起消化不良、便秘、消瘦、肌肉萎缩等与营养有关的其他体征 ，进一步生长 ，动物的免疫功效也逐渐低下 ，条件致病病原体熏染随之泛起。这在已处于帕金森病主要体征状态下的动物就很有可能无法遭受 ，致动物救治无效于成模中途殒命 ，实验失败。因此 ，一套有用的继发症防治计划和一个优异的、全价的、易于帕金森病态下动物消化吸收的营养食物配方对包管大批量造模事情的顺遂举行是很是主要的。许多研究职员在造模历程中会遇到此类问题 ，需要团结其详细情形对帕金森病模子动物可能泛起的州并发症有针对性举行预防和处置惩罚 ，以包管模子动物的恒久维持。
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