前言
结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是胃肠道中常见的恶性肿瘤，早期症状不显着，随着癌肿的增大而体现排便习惯改变、便血、腹泻腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则体现血虚、体重减轻等全身症状。其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。近20年来，其发病率呈显着上升趋势，严重危害人类康健， 故结直肠癌研究逐步成为近年来医学研究的热门之一，由此引发的种种动物模子的研究备受关注。
诱发性肿瘤动物模子制作要领相对简朴，重复性好，可以在较短时间内大宗复制，并且基本模拟癌变的历程，因此，在实验中应用较广。可是，由于诱发性肿瘤实验因保存环保问题而需防护设施，实验条件要求较高。现在，建设直结肠癌诱发模子最常用的试剂是二甲基肼(dimethylhydrazine,DMH)和其代谢产品氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)，由于AOM相比DMH具有致癌作用稳固、高效的特点，现正被越来越多的研究者接纳。另外，随着近年来研究显示恒久重复的炎症性肠病(IBD)可以诱发直结肠癌，现在也接纳葡聚糖硫酸钠(DSS)团结AOM团结制备炎症相关性直结肠癌模子。
部分造模要领
使用动物：小鼠
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1.DMH法 DMH自己并不致癌，须经氧化脱烷基才具有致癌作用。DMH在肝细胞内质网被氧化成甲基氧化偶氮甲醇，与β－葡萄糖醛酸团结，一部分经尿倾轧，一部分随胆汁进入肠腔，在肠道细菌和肠黏膜上皮β－葡萄糖苷酸酶的作用下，甲基氧化偶氮甲醇重新游离，成为肠道终末致癌物并最终引起结直肠上皮癌变。
2.AOM法 AOM是DMH在肝脏的代谢产品，作用历程与DMH相似，它通过DNA烷化，增进碱基的过失配对而致癌。这两种化学致癌物都可以诱发降结肠肿瘤，组织学体现类似人类散发性结肠癌。由于AOM相比DMH具有致癌作用稳固、高效的特点，现正被越来越多的研究者接纳。
3.AOM团结DSS法 DSS是人工合成的一种硫酸多糖，将DSS消融于水给敏感种系的小鼠或大鼠饮用，可引起以血便、溃疡和粒细胞浸润为特征的结肠炎症，其病理改变靠近人类溃疡性结肠炎。DSS肠炎的爆发可能与其影响DNA合成、抑制上皮细胞增生、破损肠黏膜屏障、巨噬细胞功效障碍及肠道菌群失调等有关。研究发明，DSS所导致的炎症以Th1/Th2细胞功效失调为特征，造成急性肠炎，经由多个循环喂养动物也可爆发慢性肠炎，并伴有一定的肠癌爆发率。加之AOM自身对肠道的影响，两者团结可以诱发稳固的炎症性肠癌。
【造模要领】：
1.DMH法 选取4月龄雄性Wistar大鼠，将DMH专心理盐水配制成浓度为4mg/ml的溶液，用1mol/L NaHCO3溶液或0.1mol/L NaOH溶液调pH为6.5，用0.22µm微孔滤器过滤除菌后备用。该浓度注射液腹腔注射，每次剂量21mg/kg，每周1次，一连20周。
2.AOM法 心理盐水配制成浓度为1.25g/L溶液，选用6周龄雌性ICR小鼠，10mg/kg体重每周一次，腹腔注射，一连应用4周，视察时间选择实验第36周，以肿瘤爆发为视察终点。
3.AOM/DSS法 选用雌性ICR、C57BL/6J或Balb/c小鼠均可。通常选用相对分子质量为40 000的DSS。第1天小鼠腹腔注射7.5~12.5mg/ kg AOM, 1周后饲喂(1%~3%)DSS1周，之后改为正常饮水14天为一个循环，共循环3次，称之为“四步法”。“两步法”与前者的区别在于将3次循环的DSS处置惩罚以后不做特殊处置惩罚缩短为单次循环，共两步完成。四步法较两步法加速了肿瘤的天生，详细办法如图7-5所示。
图7-5 AOM/DSS模子诱导要领
注：A.四步法 ；B.二步法。1：体现1周后饲喂DSS饮用水 ；2：体现即时饲喂DSS
【模子特点】：
1.DMH法 ①最后一次给药后1~4周后正法动物，直结肠癌诱发率抵达81%~100%，诱发的肿瘤均为恶性肿瘤，绝大大都为腺癌。②诱癌历程中，大鼠肠黏膜上皮依次泛起轻、中、重度不典范增生，腺瘤、腺癌。体现出肠黏膜外貌粗糙、皱褶变粗而不规则，可见单发或多发结节，有的带蒂，直径2~12mm不等。结节数目可多达20~30个，有的相互融合成巨块，结节漫衍于直肠远端及近肛门处。
2.AOM法 ①一连4周腹腔注射氧化偶氮甲烷10mg/kg为最佳的给药剂量，此最佳剂量与动物的饲养情形无关，剂量过高会导致动物殒命率升高，剂量过低会导致癌症水平较轻，差别的致癌剂最佳剂量取决于实验动物遗传配景和给药方法。②每周腹腔注射氧化偶氮甲烷10mg/kg，一连4周，在第24周爆发结肠癌的概率为100%。③差别遗传配景小鼠对AOM的敏感水平差别，敏感性由强到弱的顺序为：BALB/C小鼠与ICR小鼠有相同的作用，对氧化偶氮甲烷最敏感，C57BL/6N小鼠其次。④AOM诱导小鼠大肠癌的爆发是一个恒久的多阶段的历程，与人类大肠癌爆发历程中细胞动力学病理组织学和分子特征方面的转变特点很是相似。
3.AOM/DSS法 接纳腹腔注射AOM(10mg/kg)和饲喂2%DSS饮水处置惩罚雄性ICR小鼠后，可视察到炎症导致肿瘤形成差别时期的病理学改变。第3周有2/5的小鼠泛起结肠管状腺瘤，第4周有2/5小鼠爆发腺癌。以后，随着时间推移，肿瘤爆发率逐渐增添，第6周100％小鼠爆发腺癌。所有时间点都可视察到结肠不典范性增生。AOM/DSS模 型通过结肠黏膜的炎症和不典范性增生使肠黏膜受损，增进肿瘤爆发，伴有K-Ras和β-catenin基因突变、错配修复基因缺失和微卫星不稳固性改变。
【模子评估和应用】：
1.CRC制备乐成的概率主要取决于给药的剂量、频率、途径、待续时间以及性别、周龄、遗传配景等，同时肠道菌群、饮食、免疫状态等可通过滋扰致癌剂代谢来影响局部有用浓度。
2.DMH法和AOM法 致癌效果佳，器官选择性好，肿瘤的爆发部位、组织学类型以及肿瘤的爆发历程均与人类直肠癌十分相似，可以较好地模拟人体直肠癌爆发生长的实验研究，只是缺少人结直肠癌的前期腺瘤和后期易转移的特征。模子制备要领简朴，成模时间短，成瘤率高。
3.AOM/DSS模子 该模子是建设在炎症基础上主要的结肠癌模子之一，在致癌剂和致炎剂协同作用下模拟人类CRC的爆发生长历程。使用该模子，团结实验动物的种种基因修饰，研究职员对炎症相关性癌症癌变机制举行了系统研究，尤其在分子机制、肿瘤微情形和药物研究较多，现在应用该模子涉及肿瘤干细胞的研究匮乏，有待科研事情者进一步探索。由于AOM/DSS模子鲜见抑癌基因APC和p53突变，CRC爆发远处转移倾向低，并且患病后小鼠寿命缩短，故不适适用于肿瘤侵袭相关研究。
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